关于我们选择突变的基因,项目初始阶段,我们选择潜在的与果蝇天然免疫相关的基因进行敲除。随后,选择重要的信号通路、基因家族,逐渐扩展到全基因组范围。在选择这些敲除的目的基因时,我们优选选择目前还没有突变体报道的基因进行敲除。

我们利用CRISPR/Cas9系统制作果蝇基因突变体，大致分为三个主要步骤：设计构建gRNA表达质粒，遗传杂交产生突变，鉴定突变并建立品系。具体而言，1）通过软件为每个待敲除基因选择一个Cas9靶序列，构建至U6启动子的表达质粒；2）显微注射，获得gRNA转基因果蝇品系。将gRNA转基因果蝇与nos-Cas9工具果蝇品系杂交，后代中产生目的基因突变体；3）通过PCR并测序，选择在目的基因编码区产生移码的突变体建立稳定品系并保种。

1号染色体基因的基因型为：M/FM7c, w+; ;+/w+(or y+)。2号染色体基因的基因型为 ：M/CyO (or BcG); +/w+(or y+)。3号染色体基因的基因型为： ;+/w+(or y+); M/TM6B,Tb (or TM3,Sb)（M代表相应基因的mutation）。“w+(or y+)”表示该果蝇品系要么带有w+，要么带有y+，不可能同时带有二者。具体使用过程，建议去除w+和 y+。本中心也在持续进行这些marker所代表的元件的去除工作。

初步表型分析建议使用野生型果蝇如w1118、 yw等。基因功能的精确分析，建议先将突变体进行回交再进行实验。

我们每个基因有1-3个不同的突变体（不同的allele）。

我们的突变体的基因突变（indel）位于编码序列上，通常发生在目标基因编码序列前1/3，尽量靠近ATG的地方。具体请参考突变体“品系信息”中“Mutation”提供的序列信息。

对国内、国际的科研机构共享果蝇品系是我们的目标。目前，受相关条件限制，我们暂时只对中国大陆境内的科研机构开放共享果蝇品系。我们正在努力解决问题，尽快实现国际共享。

根据注册账户时签署的MTA文件，这是不被允许的。用户（PI）通过共享，获得相应果蝇品系的使用权，但无权未经允许将该品系私自提供给第三方。对于未经共享申请而私自接受他人从本中心获得的果蝇品系者，这是侵权行为。为了中国果蝇科研圈的健康发展，请大家保护知识产权。